1+1>2：雙藥聯(lián)手，在腫瘤內(nèi)部建造“免疫兵工廠”

本篇發(fā)表于 Nature Immunology 的研究文章《Simultaneous STING and lymphotoxin-β receptor activation induces B cell responses in tertiary lymphoid structures to potentiate antitumor immunity》系統(tǒng)性地探討了通過(guò)同時(shí)激活STING和LTβR通路誘導(dǎo)三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)（TLS）形成，從而增強(qiáng)抗腫瘤免疫的機(jī)制與治療效果。

一、 研究背景 (Research Background)

本研究立足于腫瘤免疫治療中的一個(gè)重要前沿領(lǐng)域：三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)（Tertiary Lymphoid Structures, TLS）。TLS是在慢性炎癥或腫瘤微環(huán)境中異位形成的、類似于次級(jí)淋巴器官（如淋巴結(jié)）的淋巴組織。其典型特征包括：

1. B細(xì)胞濾泡：包含活化的B細(xì)胞、濾泡樹突狀細(xì)胞（FDCs）和表達(dá)Bcl6的濾泡輔助性T細(xì)胞（Tfh cells）。

2. T細(xì)胞區(qū)：CD4+和CD8+ T細(xì)胞聚集區(qū)域。

3. 高內(nèi)皮微靜脈（High Endothelial Venules, HEVs）：一種特化的血管結(jié)構(gòu)，是淋巴細(xì)胞從血液循環(huán)中進(jìn)入淋巴組織或TLS的主要途徑。

臨床意義：大量臨床研究表明，在多種癌癥（如乳腺癌、肺癌、胰腺癌、肉瘤）中，腫瘤內(nèi)存在富含B細(xì)胞的TLS與患者更好的預(yù)后、對(duì)化療更佳的反應(yīng)以及對(duì)抗PD-1/PD-L1等免疫檢查點(diǎn)抑制劑（ICI）治療的積極響應(yīng)顯著相關(guān)。這表明，TLS可能是誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)、在腫瘤局部產(chǎn)生高效抗腫瘤免疫反應(yīng)的主要區(qū)域。

科學(xué)問(wèn)題：盡管TLS如此重要，但如何通過(guò)治療手段在腫瘤中主動(dòng)誘導(dǎo)出功能成熟（而非僅是淋巴細(xì)胞聚集）的TLS，是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。先前的研究表明：

單獨(dú)激活LTβR（通過(guò)其配體LIGHT或激動(dòng)性抗體）可以促進(jìn)HEV形成和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，但未能有效誘導(dǎo)出具有生發(fā)中心反應(yīng)的成熟TLS。

單獨(dú)激活STING（通過(guò)其激動(dòng)劑如ADU-S100）可以強(qiáng)烈激活先天免疫，產(chǎn)生I型干擾素和炎癥因子，誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞聚集，但同樣缺乏B細(xì)胞濾泡和生發(fā)中心結(jié)構(gòu)，無(wú)法形成功能性TLS。

研究假說(shuō)：基于對(duì)臨床樣本（TLS-rich vs. TLS-free乳腺癌）的血管內(nèi)皮轉(zhuǎn)錄組分析，研究者發(fā)現(xiàn)I型干擾素（STING通路下游）和淋巴毒素（LTβR通路配體）的信號(hào)同時(shí)富集。因此，他們提出*同時(shí)激活先天免疫（STING）和淋巴器官發(fā)育核心通路（LTβR）可能協(xié)同作用，模擬TLS富集腫瘤的微環(huán)境特征，從而在治療上誘導(dǎo)出功能完整的TLS，并最終激發(fā)強(qiáng)大的抗腫瘤免疫。

二、 研究結(jié)果 (Research Results)

本研究通過(guò)一系列嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)，逐步驗(yàn)證并深化了上述假說(shuō)，主要結(jié)果如下：

1. 表型發(fā)現(xiàn)：STING與LTβR協(xié)同誘導(dǎo)成熟TLS和HEV形成

聯(lián)合治療（而非單藥）能在多種小鼠腫瘤模型（皮下/原位胰腺癌、乳腺癌、橫紋肌肉瘤）中高效誘導(dǎo)出在結(jié)構(gòu)上類似于人類癌癥中TLS的結(jié)構(gòu)，其特征為：密集的CD19+ B細(xì)胞簇（表達(dá)生發(fā)中心標(biāo)志物Bcl6和增殖標(biāo)志物Ki-67）、被CD3+ T細(xì)胞包圍、內(nèi)部存在Tfh細(xì)胞（Bcl6+CD4+）、并伴有CD21/CD23+ 濾泡樹突狀細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)。

這些結(jié)構(gòu)周圍有大量MECA-79+ HEVs形成。

細(xì)胞依賴性：TLS的形成嚴(yán)格依賴于T細(xì)胞（CD4+和CD8+ T細(xì)胞均必需）。有趣的是，HEV的形成依賴于CD8+ T細(xì)胞和B細(xì)胞，但不依賴于CD4+ T細(xì)胞。這揭示了免疫細(xì)胞間在構(gòu)建抗腫瘤微環(huán)境中的復(fù)雜且精細(xì)的分工。

2. 功能驗(yàn)證：聯(lián)合治療有效抑制腫瘤生長(zhǎng)并防止復(fù)發(fā)

在初始治療中，聯(lián)合治療顯示出zui強(qiáng)的腫瘤生長(zhǎng)抑制效果，該效果依賴于CD8+ T細(xì)胞。

zui ju說(shuō)服力的發(fā)現(xiàn)在于長(zhǎng)期保護(hù)效應(yīng)：在一個(gè)模擬腫瘤手術(shù)切除后復(fù)發(fā)的“新輔助治療"模型中，接受聯(lián)合治療并因此在其原發(fā)瘤中形成TLS的小鼠，在二次攻擊時(shí)能夠幾乎wan全排斥腫瘤，獲得長(zhǎng)期生存。而STING單藥治療幾乎無(wú)效，LTβR單藥治療雖有部分保護(hù)效果，但遠(yuǎn)遜于聯(lián)合治療。這表明聯(lián)合治療誘導(dǎo)了一種強(qiáng)大的免疫記憶。

3. 機(jī)制深入：聯(lián)合治療優(yōu)化TLS“適應(yīng)性"（Fitness），驅(qū)動(dòng)B細(xì)胞高效活化與分化

流式細(xì)胞術(shù)和免疫熒光顯示，聯(lián)合治療組腫瘤中浸潤(rùn)的B細(xì)胞不僅數(shù)量多，而且活化狀態(tài)（CD69+, CD44+）、記憶B細(xì)胞（CD73+PD-L2+）和抗體分泌漿細(xì)胞（CD138+IgG+）的比例顯著高于LTβR單藥組。這表明STING的加入極大地提升了TLS中B細(xì)胞反應(yīng)的“質(zhì)量"和“成熟度"。

轉(zhuǎn)錄組學(xué)（Bulk RNA-seq）分析證實(shí)，聯(lián)合治療重塑了腫瘤免疫微環(huán)境，基因簽名顯示：

先天免疫與炎癥：I型干擾素、TNF、TLR等通路持續(xù)激活。

適應(yīng)性免疫與B細(xì)胞功能：Tfh相關(guān)基因（如IL-21, IL-21R）、B細(xì)胞活化/分化和抗體類別轉(zhuǎn)換關(guān)鍵基因（如CD40, CD40L, AICDA）、漿細(xì)胞標(biāo)志物（Mzb1）顯著上調(diào)。

免疫趨化與血管重塑：關(guān)鍵趨化因子CXCL13及其受體CXCR5高表達(dá)。

Th1/Th2極化：向Th2型應(yīng)答傾斜（利于體液免疫），同時(shí)抑制Th17應(yīng)答。

單細(xì)胞RNA-seq（scRNA-seq）提供了更高分辨率的洞察：

B細(xì)胞群體發(fā)生顯著擴(kuò)增，且涵蓋了從濾泡B細(xì)胞到記憶B細(xì)胞、漿細(xì)胞乃至長(zhǎng)壽命漿細(xì)胞的完整分化譜系。

類別轉(zhuǎn)換分析顯示，聯(lián)合治療顯著促進(jìn)向IgG的轉(zhuǎn)換，而非IgA。

T細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合治療促進(jìn)了初始CD4+ T細(xì)胞（CCR7+SELL+）的招募（與HEV增加相符）和記憶CD8+ T細(xì)胞的形成。

4. 免疫學(xué)貢獻(xiàn)：闡明體液免疫與細(xì)胞免疫的共同作用

體液免疫：聯(lián)合治療的小鼠血清中含有高水平的腫瘤抗原特異性IgG抗體。將這種血清被動(dòng)轉(zhuǎn)移給 na?ve 小鼠，能顯著抑制其腫瘤生長(zhǎng)。此外，在聯(lián)合治療后的骨髓中發(fā)現(xiàn)了更多的長(zhǎng)壽命漿細(xì)胞，這是長(zhǎng)期體液免疫的基地。B細(xì)胞缺陷小鼠無(wú)法從聯(lián)合治療中獲得長(zhǎng)期保護(hù)，證明了B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫bu可或缺。

細(xì)胞免疫：盡管聯(lián)合治療并未顯著增加腫瘤中T細(xì)胞的總體數(shù)量，但它改變了T細(xì)胞的質(zhì)量和組成（如增加記憶CD8+ T細(xì)胞）。CD8+ T細(xì)胞或NK細(xì)胞的剔除會(huì)廢除聯(lián)合治療帶來(lái)的保護(hù)作用，證明了細(xì)胞免疫同樣是必需的。

三、 研究結(jié)論 (Research Conclusion)

本研究系統(tǒng)地論證了一個(gè)全新的癌癥免疫治療策略：

1.  協(xié)同誘導(dǎo)：同時(shí)激活STING和LTβR通路是一種有效的治療手段，能夠在多種類型的腫瘤（包括“免疫冷"腫瘤）中協(xié)同誘導(dǎo)出結(jié)構(gòu)完整、功能成熟的TLS，而單一通路激活則不足以實(shí)現(xiàn)。

2.  機(jī)制創(chuàng)新：STING的激活不僅提供早期的先天免疫刺激和CD8+ T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤殺傷，更重要的是它與LTβR激活在誘導(dǎo)TLS方面發(fā)揮了互補(bǔ)和增強(qiáng)的作用：LTβR驅(qū)動(dòng)了TLS和HEV的“骨架"搭建，而STING則提供了關(guān)鍵的“信號(hào)指令"，優(yōu)化了TLS的免疫微環(huán)境，特別是促進(jìn)了B細(xì)胞在TLS內(nèi)的克隆擴(kuò)增、抗體類別轉(zhuǎn)換、分化為記憶B細(xì)胞和長(zhǎng)壽命漿細(xì)胞，從而賦予了TLS強(qiáng)大的“適應(yīng)性"（Fitness）。

3.  雙重免疫：該策略所產(chǎn)生的強(qiáng)大抗腫瘤免疫力是體液免疫（B細(xì)胞/抗體）和細(xì)胞免疫（CD8+ T細(xì)胞/NK細(xì)胞）共同作用的結(jié)果。初始反應(yīng)由CD8+ T細(xì)胞主導(dǎo)，而長(zhǎng)期保護(hù)和對(duì)復(fù)發(fā)的防止則高度依賴于B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫。

4.  臨床轉(zhuǎn)化前景：該研究為解決當(dāng)前免疫治療的瓶頸（如原發(fā)/繼發(fā)性耐藥、腫瘤復(fù)發(fā)）提供了新思路。鑒于STING激動(dòng)劑已在臨床試驗(yàn)中，且針對(duì)LTβR的人源化激動(dòng)抗體有望開發(fā)，這一聯(lián)合策略具有ji高的臨床轉(zhuǎn)化潛力，有望成為增強(qiáng)現(xiàn)有免疫治療（如免疫檢查點(diǎn)抑制劑、癌癥疫苗）療效的基石性方案。